CTAB ile Bitkilerden Yüksek Miktarda RNA İzolasyonu

Gerekli Malzemeler

Muhafaza edilen bu örneklerden RNA izolasyonu CTAB protokolüne (Untergasser’s Lab. Summer 2008) göre derlenmiştir.

Buna protokole göre:

1. Alınan örnekler sıvı azotta ezilir.
2. CTAB solüsyonuna %1’lik merkaptoetanol eklenir.
3. 0,5 gr alınıp üzerine 600 µl CTAB eklenir ve iyice havanda ezilir.
4. Soğuk kloroform eklenir ve hızlıca karıştırılır.
5. 2dk yüksek hızda santrifüz edilir.
6. Üç faza ayrılan karışımdan üst faz süpernatant dikkatlice alınır ve aynı hacimde üzerine isopropanol eklenir ve karıştırılır.
7. 15 dk yüksek hızda santrifüj yapılır.
8. Üst sıvı dökülür.
9. Pellet 600 µl %70lik etanol ile yıkanır ve elle çalkalanır.
10. 3 dk yüksek hızda santrifüj yapılır.
11. Üst sıvı dikkatlice dökülür.
12. Pellet 90 µl saf su eklenerek, 15dk 65^oC’de su banyosunda inkübe edilir.
13. 5 dk yüksek hızda santrifuz edilir.
14. Üst sıvı yeni tüpe alınır.
15. 30 µl 8M LiCl eklenir ve iyice karıştırıldıktan sonra sonra 30dk -20^oC bekletilir.
16. 4^oC yüksek hızlı hızda 30dk santrifüj yapılır.
17. Üst dıvı dökülür.
18. 100 µl %70lik etnol eklenerek karıştırılır.
19. 2 dk yüksek hızda santrifüj yapılır.
20. Üst sıvı dökülür.
21. Pellet 20 µl DNA/RNA free saf su eklenerek çözülmesi için 15 dk 65^oC inkübe edilir.
22. 5 dk yüksek hızda santrifüj yapılır.
23. Üst sıvı yeni bir tüpe aktarılır ve -80^oC de saklanır.

Kaynak : Untergasser A. “RNA Miniprep using CTAB” Untergasser’s Lab. Summer 2008. (include here the date when you accessed these page).
<http://www.untergasser.de/lab/protocols/miniprep_rna_ctab_v1_0.htm>.